Cette configuration "pionnière" récemment développée et validée au sein de la plateforme PICT (Platform for Imaging Cells and Tissues, Institut DDUV, UCLouvain-Bruxelles) est très utile pour faire de la Microscopie en Temps de Vie de Fluorescence (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy - FLIM).
La FLIM est une technique d'imagerie basée sur les différences de taux de décroissance de l'émission de photons d'un fluorophore et qui utilise la durée de vie de la fluorescence du fluorophore plutôt que son intensité.
Pourquoi et quand le microscope Airyscan a-t-il été installé au sein de la plateforme PICT ?
La microscopie Airyscan est une nouvelle génération de microscopie confocale capable d'atteindre une plus haute résolution, une plus grande vitesse et une plus grande sensibilité que la microscopie confocale classique. Le dernier microscope acquis par la plateforme PICT, à savoir le Zeiss LSM980, est basé sur cette méthodologie. Il a été installé en 2020 et est désormais pleinement opérationnel.
Il est adapté à l'analyse d'un large éventail d'échantillons biologiques, allant des protéines isolées, petites vésicules et cellules uniques, aux tissus et souris vivantes. Il donne d'excellents résultats dans les études de colocalisation, l'analyse spectrale et la visualisation d'échantillons ayant une certaine épaisseur.
Pourquoi coupler l'Airyscan avec la microscopie multiphotonique ?
Outre les applications mentionnées ci-dessus, la combinaison de la méthodologie Airyscan avec un laser multiphotons fait de ce nouveau microscope un instrument unique très utile pour répondre à un certain nombre de questions biologiques nécessitant la FLIM.
Cette technique permet d'étudier le microenvironnement des fluorochromes sans les effets perturbateurs de la diffusion des photons, du photoblanchiment ou des effets de concentration locale de la sonde fluorescente.
La FLIM a été développée et validée au sein de la plateforme PICT pour évaluer la fluidité membranaire des bactéries (Mozaheb et al, mSphere 2022). D'autres applications liées à la FLIM sont en cours de développement, notamment l'évaluation de la fluidité de la membrane des globules rouges humains lors de la sénescence et l'interaction des molécules fluorescentes par la méthode FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)-FLIM.
