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Hematoxylin-Eosin (H&E)
Toluol 3 x 5 min
Éponger sur papier absorbant
Isopropanol 3 x 5 min
eau courante 5 min
eau dist. 5 min
Éponger sur papier absorbant
Hématoxyline de Mayer (VWR-Klinipath # VWRK64040/1) 10 min
eau courante 5 min
eau dist. 5 min
Éponger sur papier absorbant
Solution aqueuse Eosine jaunâtre 0.5 % (Carl Roth #X883.2) 4 min
eau courante 30 sec
eau dist. 30 sec
Laisser sécher à l'air 15 min
Montage: Sakura Tissue-Tek Film
► Résultat
noyaux: bleu foncé
cytoplasme: rose foncé
collagène, élastine, érythrocytes: rouge-orange
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Picro-Sirius red
Toluol 3x5 min
Éponger sur papier absorbant
Isopropanol 3 x 5 min
eau courante 3 min
eau dist. 3 min
Éponger sur papier absorbant
Acide phosphomolybdique (Roth #4440.3, poudre à conserver à 4°C) 2% frais 2min
eau courante 3 min
eau dist. 3 min
Éponger sur papier absorbant
Direct Red 80 (cfr ci-dessous) 2 heures à l’abri de la lumière (cette solution peut être ré-utilisée plusieurs fois)
Éponger sur papier absorbant
HCl 0,01N frais 2min
Éponger sur papier absorbant
eau dist. bain très rapide (5 secondes)
Méthanol absolu très rapide (3 x 10 allers-retours)
Éponger sur papier absorbant
Xylene 3 x 5 min
Montage (Dako coverslipper)
► Pour les coupes congelées :
Enlever l’OCT au PBS 3x3 min
eau dist 3 min
Bouin 30 min
Rincer à l'eau courante puis distillée
Acide phosphomolybdique (Roth #4440.3) 1,5% frais 2min
eau courante puis distillée
Direct Red 80 (cfr ci-dessous) 2 heures à l’abri de la lumière
HCl 0,01N frais 2min
eau dist. bain très rapide
Méthanol absolu très rapide
Éponger sur papier absorbant
Xylene 3 x 5 min
Montage (Dako coverslipper)
► Solution Sirius Red (100ml)
0,1 % Direct Red 80 (Sigma#365548) dans une solution saturée d’acide picrique (Sigma #P6744).
NB : préparer la solution de colorant 24h avant utilisation pour que le précipité orange se dépose.
► Résultat
collagène: rouge
bruit de fond: jaune
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Trichrome bleu de Masson
Toluol 3 x 5 min
Éponger sur papier absorbant
Isopropanol 3 x 5 min
eau courante 3 min
eau dist. 3 min
Éponger sur papier absorbant
Hématoxyline de Mayer (Sigma # MHS32) 10 min
eau courante 3 min
eau dist. 3 min
Éponger sur papier absorbant
Ponceau-Fuschine (cfr ci-dessous) 15 min
eau dist. 1 bain rapide (10 sec)
Éponger sur papier absorbant
Acide phosphomolybdique (Roth #4440.3) 1.5% frais 5 min
eau dist 1 bain rapide ( 10 sec )
Éponger sur papier absorbant
Bleu d’aniline (cfr ci-dessous) 1 min
Éponger sur papier absorbant
Acide phosphomolybdique (Roth #4440.3) 1.5% frais 5 min
eau dist 1 bain rapide ( 10 sec )
Éponger sur papier absorbant
Méthanol rapide ( 3 x 10 sec )
Éponger sur papier absorbant
Xylene 3x 5 min
Montage (Dako coverslipper)
► Solution Ponceau-Fuschine :
1 gr de Ponceau – Xylidine (Sigma #P2395-25g) dans 100 ml d’H2O distillée, porter à ébullition et après refroidissement ajouter 1 ml d’acide acétique glacial (VWR #20104.243)
1 gr de Fuschine acide (Merck #1.05231.0025) dans 100 ml d’H2O distillée, porter à ébullition et après refroidissement ajouter 1 ml d’acide acétique glacial (VWR #20104.243)
Prendre 20 ml de chaque solution-mère et porter à 400 ml avec de l’H2O distillée
► Solution Bleu d'aniline :
1 gr de Bleu d’aniline (Roth #4002.2) dans 100 ml d’H2O distillée.
Porter à ébullition, après refroidissement + 1 ml d’acide acétique glacial (VWR #20104.243)
► Résultat
collagène: bleu
noyaux: noir
muscle, cytoplasme, kératine: rouge-mauve